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葉綠素含量測定過程全解析

來源: 51wenwangwen.com  類別:實用技術  更新時間:2011-05-07  閱讀
【本資訊由中國糧油儀器網提供】葉綠素含量測定過程全解析
已知葉綠素a、b的80%丙酮提取液在紅光區的最大吸收峰分別為663nm和645nm,又知在波長663nm下,葉綠素a、b在該溶液中的比吸收系數分別為82.04和9.27,在波長645nm下分別為16.75和45.60,可根據加和性原則列出以下關系式:
D663 = 82.04Ca+9.27Cb (1)
D645 = 16.75Ca+45.60Cb (2)
式(1)、(2)中的D663和D645為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的光密度,Ca、Cb分別為葉綠素a和b的濃度,以mg/L為單位。解方程組(1)、(2),得:
Ca = 12.72D663 – 2.59D645 (3)
Cb = 22.88D645 – 4.67D663 (4)
將Ca與Cb相加即得葉綠素總量(CT):
CT = Ca + Cb =20.29D645 + 8.05D663 (5)
另外,由于葉綠素a、b在652nm的吸收峰相交,兩者有相同的比吸收系數(均為34.5),也可以在此波長下測定一次光密度(D652)而求出葉綠素a、b總量:
CT =(D652 × 1000)/ 34.5 (6)
在有葉綠素存在的條件下,用分光光度法可同時測定出溶液中類胡蘿卜素的含量。
Lichtenthaler等對Arnon法進行了修正,提出了80%丙酮提取液中三種色素含量的計算公式:
Ca = 12.21D663 – 2.81D646 (7)
Cb = 20.13D646 – 5.03D663 (8)
Cx·c=(1000D470 – 3.27Ca – 104Cb)/ 229 (9)
式中:Ca、Cb分別為葉綠素a和b的濃度;Cx·C為類胡蘿卜素的總濃度;D663、D646和D470分別為葉綠體色素提取液在波長663nm、646nm和470nm下的光密度。
由于葉綠體色素在不同溶劑中的吸收光譜有差異,因此,在使用其他溶劑提取色素時,計算公式也有所不同。葉綠素a、b在96%乙醇中最大吸收峰的波長分別為665nm和649nm,類胡蘿卜素為470nm,可據此列出以下關系式:
Ca = 13.95D665 – 6.88D649 (10)
Cb = 24.96D649 – 7.32D665 (11)
Cx·c=(1000D470 – 2.05Ca – 114.8Cb)/ 245 (12)
以上就是實驗室測定葉綠素含量的全過程,是根據朗伯—比爾定律,某有色溶液的光密度D與其中溶質濃度C和液層厚度L成正比,即:D=kCL。這是其中的標準方法,當然,我們有時也會選擇葉綠素測定儀來測定葉綠素含量,因為葉綠素測定儀快速、簡便,而且其結果精確度也很好,現在很多農業機構、大學、研究機構等,都紛紛置備葉綠素測定儀,用于葉綠素含量的快速測定。
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